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1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。
表皮生長(cháng)因子抗體
磷酸化真核翻譯延長(cháng)因子2抗體
真核延伸因子激酶2抗體
磷酸化真核延伸因子激酶2抗體
真核啟動(dòng)因子2α抗體
磷酸化一氧化氮合成酶3抗體
真核翻譯延長(cháng)因子2抗體
癌基因ERG3抗體
豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體
FAS凋亡抑制分子3抗體
纖維束1抗體
叉頭蛋白P3抗體
免疫球蛋白G Fc段受體I
叉頭蛋白M1抗體
磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體
磷酸化粘著(zhù)斑激酶抗體
絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體
肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體
凝血因子13抗體
濾泡樹(shù)突細胞分泌蛋白抗體
纖維母細胞生長(cháng)因子13抗體
骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體
口蹄疫病毒A型抗體