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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀(guān)察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實(shí)驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng),未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。000~2000g 離心 min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實(shí)驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
GH3, 大鼠垂體生長(cháng)激素腺瘤
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞
QBC-939, 人膽管癌細胞
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SGC-7901, 人胃腺癌細胞系
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A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞
WM35, 人黑色素瘤細胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
WM451, 人黑色素瘤細胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞
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HNE2, 人鼻咽癌細胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系
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