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鳥(niǎo)類(lèi)髓細胞瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:pANCA檢測試劑盒供產(chǎn)氣莢膜梭菌動(dòng)力和硝酸鹽還原測定用緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養基
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 鳥(niǎo)類(lèi)髓細胞瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) |
英文名稱(chēng) | Avian Myelocytoma Virus(AMV)RTPCR |
貨號 | LZP6399 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
人P0蛋白抗體(IgM)elisa試劑盒Anti-CST3 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細胞生物
人NOD樣受體(NLR)elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 轉錄調節因子 表觀(guān)遺傳學(xué)
人G1/S特異性細胞周期蛋白E1(CCNE1)elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 染色質(zhì)和核信號 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉導 Alzheimer's
人FAM172A蛋白(FAM172A)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學(xué) 信號轉導 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號
人COLL2-1NO2 elisa試劑盒Anti-CSTA Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細胞生物 信號轉導 轉錄調節因子 激酶和磷酸酶 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號
人CC趨化因子受體1(CCR1)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細胞生物 信號轉導 轉錄調節因子 糖尿病
人B細胞生長(cháng)因子(BCGF)elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細胞生物 信號轉導 糖尿病 轉運蛋白
人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)elisa試劑盒Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 G蛋白偶聯(lián)受體
牛血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa試劑盒Anti-CSTB Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 表觀(guān)遺傳學(xué)
牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)elisa試劑盒Anti-CTAG1A Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉導 激酶和磷酸酶
牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 發(fā)育生物學(xué) 生長(cháng)因子和激素 細胞周期蛋白
牛維生素A(VA)elisa試劑盒Anti-CTBP1 Antibody(原貨號PB0400)研究領(lǐng)域 細胞生物 染色質(zhì)和核信號 細胞周期蛋白 表觀(guān)遺傳學(xué)
綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody(原貨號PB0401)研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 信號轉導 干細胞 細胞周期蛋白
大鼠可溶性CD80(sCD80)elisa試劑盒Anti-CTCF Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化
大鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)elisa試劑盒Anti-CTBP2 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化
Bacillusanthracisphage
M-ENDO broth 膜過(guò)濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克 incubation media M-ENDO broth 膜過(guò)濾ENDO肉湯 1.10750.0500 MERCK默克
胰化大豆瓊脂 250g 普通的或營(yíng)養要求較高的細菌的培養,還醫藥工業(yè)潔凈室無(wú)菌程度的監測。
兔骨髓間質(zhì)干細胞成軟骨誘導分化*培養基Rabbitbonemarrowmesenchymalstemcellsintochondrocytesinduceddifferentiationofcompletemedium
SIM動(dòng)力培養基 250g 動(dòng)力試驗
CLED培養基添加劑 CLED Medium Supplement 1毫升×5支 加入100mlC.L.E.D培養基中
PEA瓊脂 PEA Agar 250克 從含革蘭氏陰性菌的標本中分離培養革蘭氏陽(yáng)性菌
NTM培養基 NTM Medium 250克 淋球菌的分離培養
伊格爾培養基 SMEM 10升 細胞培養用
鳥(niǎo)類(lèi)髓細胞瘤病毒PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)中國倉鼠卵巢細胞(缺失二氫葉酸還原酶),CHO-dhfr細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
中國倉鼠卵巢細胞,CTLA4 IG-24細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
豬鼻甲黏膜成纖維細胞,PT-K75細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
豬肺泡巨噬細胞,3D4/21細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
豬腎,PK-1細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
豬腎,PK-13細胞1 x 10^6 cells/T25培養瓶
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。