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羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:GCK檢測試劑盒對已開(kāi)封的標準品(對照品)管理方面的問(wèn)題應做嚴格的規定,不應同未開(kāi)封的標準品(對照品)放在一起繼續使用
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱(chēng) | Orf Virus(ORFV)PCR |
貨號 | LZP7084 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Streptokinase recombinantD-果糖-6-磷酸二鈉,二 98%印刷標簽,用于100G(ML)包裝,尺寸:94mm*55mm
Phosphotransacetylase from Bacillus stearothermophilus鈣熒光探針FIuo,3-AM 70%印刷標簽,用于500G(ML)及以上包裝,尺寸: 105mm*86mm
Casein熒蒽 分析標準品印刷標簽,超大號, 95mm*210mm
Casein Na saltD-半乳糖 分析標準品印刷標簽,大號,尺寸: 62mm*150mm
Heparin sodium salt羥基乙酰胺 98%印刷標簽,中號, 42mm*98mm
Heparin lithium三油酸甘油酯 99%印刷標簽,小號, 25mm*100mm
SPA戊二酰氯 97%印刷標簽,超小號,尺寸: 18mm*100mm
Collagen甘草次酸(α型) 分析標準品,>98%21mm空白小標簽 21mm
BSAN-(γ-L-谷氨酰)-1-萘胺 BR阿拉丁免檢小標簽 125mm*32mm
OVAL-甘油酸鈣鹽,一 97%阿拉丁免檢大標簽 160mm*60mm
HASDL-甘油 90%有此處開(kāi)封 標簽 140*20mm
Avidin(chiken egg white)甘氨脫氧膽酸 97%內有貨單此處開(kāi)封 標簽 140*20mm
Streptavidin葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)易碎物品 標簽 150*120mm
Methyl albumin葡萄糖 分析標準品L-乳酸鈣 USP級
Hb胰高血糖素氫氯化物(人) ≥97.0% (HPLC)(-)-乳酸乙酯 98%
Hb羥基萘酚藍 IND,94%(HPLC)(-)-乳酸乙酯 99%
硫酸鏈霉素IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 干擾素-γ多肽抗原(大、小鼠)SKAR DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗體
硫酸鏈霉素(標準品)IFN- Gamma(Interferon Gamma)Human 干擾素-γ多肽抗原(人)SKALP/Elafin 彈性蛋白酶抑制劑抗體
硫酸雙氫鏈霉素IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat 干擾素-β抗原SKA3 紡錘體和著(zhù)絲粒相關(guān)蛋白3抗體
雙氯芬酸鈉IFN- Beta (Interferon Beta) human 干擾素-β抗原SKA2 紡錘體和著(zhù)絲粒相關(guān)蛋白2抗體
雙氯芬酸鈉(標準品)PSCA 前列腺干細胞抗原SKA1 紡錘體和著(zhù)絲粒相關(guān)蛋白1抗體
加巴噴丁ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)SISP1/GI24 應激誘導分泌蛋白1抗體
加巴噴?。藴势罚?/font>PRRSV M protein 豬藍耳病病毒M蛋白SIRT7 沉默調節樣蛋白SirT7抗體
多潘立酮Newcastle disease virus/HRP 雞新城疫疫苗(雞瘟4型混合病毒)偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶SIRT6 沉默調節相關(guān)蛋白6抗體
多潘立酮(標準品)sIgA 大鼠分泌型IgA(抗原)SIRT5 沉默調節蛋白5抗體
帕潘立酮Melamine/KLH 三聚氰胺與血藍蛋白偶聯(lián)物SIRT4/SIR 2 like protein 4 沉默調節相關(guān)蛋白4抗體
羊口瘡病毒PCR檢測試劑盒規格人環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:保存:-20℃25毫克
人環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:500毫升
人環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT支
人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人環(huán)磷酰(CTX)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100克
人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:25克
人混合系列蛋白激酶樣結構域(MLKL)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:5克
人活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃1克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。