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產(chǎn)紫青霉PCR檢測試劑盒規格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:UPP1檢測試劑盒無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)紫青霉PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱(chēng) | Penicillium purpurogenumPCR |
貨號 | LZP7128 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
BBIH乙酸香葉酯 96%2,6-二氟-4-羥基苯 98%
Hoechst 33342乙酸葉酯 98%2,4-二甲酸 98%
Fluorescein正己 Standard for GC,>99.5%(GC)L-蘋(píng)果酸二甲酯 98%
Fluorescein disodium salt正己 98%2,2-二甲基丁酸 98%
DAPI正己 分析標準品,>99.8%(GC)3,3-二甲基烯酸 98%
Phelphthalein正己 99%2,5-二甲酸 98%
Phelphthalein test paper正庚酸 Standard for GC3,5-二甲基-4-吡唑 97%
Phelphthalexone正庚酸 AR,98.0%2,5-二甲基溴苯 98%
Thymol正庚酸 分析標準品N-基二硫代亞胺碳酸二甲酯 90%
Rhodamine 123正己酸 Standard for GC, ≥99.5% (GC)L-(-)-二(對甲酰) 97%
Rhodamine B正己酸 CP,98.0% 3-(二甲氨基)烯酸乙酯 98%
TMB正己酸 分析標準品3-氨基巴豆酸乙酯 99%
3,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid-1 component正己酸 AR,99.0%硫代草氨酸乙酯 95%
3,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid membrane substrate己酸葉酯 98%乙酸乙酯 98%
TMB•2HC1己酸葉酯 98%,Kosher 二乙酯 97%
TMB-US(ultra sensitive) solution正庚 Standard for GC,>99.5%(GC)3-(5-乙基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯甲酸 97%
D-泛酸鈣,維生素B5Immufluorescence Antibody Dilution BufferRBBP6/P2P-R 增殖潛能相關(guān)蛋白抗體
脫羧氯雷他定/地氯雷他定AUF1/hnRNP D (D6O4F) Rabbit mAbRBBP6 視網(wǎng)膜母細胞瘤結合蛋白6抗體
脫羧氯雷他定/地氯雷他定(標準品)PathScan® Total Caveolin-1 Sandwich ELISA KitRBBP5 視網(wǎng)膜母細胞瘤結合蛋白5抗體
地塞米松磷酸鈉UHRF1 (D6G8E) Rabbit mAbRbAp48 視網(wǎng)膜母細胞瘤結合蛋白P48抗體
地塞米松磷酸鈉(標準品)BackDrop® Green Background SuppressorRB1CC1 RB1的誘導卷曲蛋白RB1CC1抗體
磷酸奧司他韋GFAP (D1F4Q) XP® Rabbit mAbRb/P105 RB 成視網(wǎng)膜細胞瘤基因抗體
磷酸奧司他韋(標準品)GFAP (D1F4Q) XP® Rabbit mAbRat secretory IgA 分泌型免疫球蛋白A抗體
鹽酸地布卡因YAP (1A12) Mouse mAbRASSF8 RAS家族關(guān)聯(lián)結構域蛋白8抗體
多奈哌齊BNIP3L/Nix (D4R4B) Rabbit mAbRASSF7 RAS家族關(guān)聯(lián)結構域蛋白7抗體
多尼培南(標準品)Phospho-DNAJC2/MPP11 (Ser47) AntibodyRASSF6 RAS家族關(guān)聯(lián)結構域蛋白6抗體
產(chǎn)紫青霉PCR檢測試劑盒規格人利什曼原蟲(chóng)抗體(LeishimariaAb)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:50克
人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1米
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體(GM-CSFAb)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫升
人粒細胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT支
人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃100毫升
人痢疾內阿米巴抗原ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:1克
人鏈激酶(SK)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT25克
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。