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純綠青霉PCR檢測試劑盒規格上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:Resistin檢測試劑盒顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 純綠青霉PCR檢測試劑盒規格 |
英文名稱(chēng) | Penicillium viridicatumPCR |
貨號 | LZP7132 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
1,10-Phenanthroline hydrate2-甲基丁酸 98%(R)-1-Boc-3-羥基吡咯烷 98%
o-Phenanthroline hydrochloride2-甲基丁酸 天然, ≥98%, Kosher2-(1-哌啶基)苯 97%
2-Nitrophel對甲氧基苯甲 98%喹唑啉 98%
4-Nitrophel對甲氧基苯甲 ≥98%, FCC, FG三氟磺酸鈧 98%
2-Nitroaniline乙酸薄荷酯 98%四氫-2 2-二甲基-4H-吡喃-4-酮 95%
4-Nitroaniline十四酸 Standard for GC,≥99.5% (GC)三(4-溴苯基)胺 98%
3-Nitroaniline十四酸 98%2-甲?;邕?97%
Alumin十四酸 分析標準品,≥99.5% (GC500ml透氣不透液墊片 40mm口徑 配套42mm口徑蓋
Rhodamine 6G十四酸 ≥98%,FCC, FG1,3-二甲基酸 99%
Rosolic acid十四酸 ≥99%(GC)3-苯基吡啶 97%
Rhodizonic acid sodium salt苯甲酸甲酯 AR,98%2-苯基吡啶 98%
5-Nitro-1,10-phenanthroline苯甲酸甲酯 99%碳酸鋇 AR,99%
Pyrocatechol violet月桂酸甲酯 99%碳酸鍶 AR,99%
Carbon Activated月桂酸甲酯 Standard for GC,≥99.5% (GC)2-環(huán)戊酮 97%
Acid red 66十二酸甲酯 分析標準品碳酸鋇 AR,99%
m-Cresol purple甲基環(huán)戊烯酮 98%碳酸鋇 CP,98%
馬來(lái)酸氟伏沙明VDAC (D73D12) Rabbit mAb (HRP Conjugate)RAMP1 受體活性修飾蛋白1抗體
馬來(lái)酸氟伏沙明(標準品)MacroH2A1.1 (D5F6N) Rabbit mAbRAMP/CDT2 維甲酸調節核基質(zhì)相關(guān)蛋白
福美斯坦GSK-3β (D5C5Z) XP® Rabbit mAbRALDH2 視黃脫氫酶2型抗體
福美斯坦(標準品)GSK-3β (D5C5Z) XP® Rabbit mAbRALB Ras樣蛋白B抗體
福辛普利鈉BRE (D8Q1J) Rabbit mAbRALA+RALB Ras樣蛋白A+B抗體
呋塞米(速尿)SMARCAD1 AntibodyRALA Ras樣蛋白A抗體
呋塞米(標準品)p44/42 MAPK (Erk1/2) Blocking Peptide (#4696 Specific)RAIDD CASP2凋亡相關(guān)蛋白抗體
加蘭他敏Eps15 (D3K8R) Rabbit mAbRAG2 重組激活基因2蛋白抗體
吉非羅齊HIRA (D6O8L) Rabbit mAbRAG1/RNF74 環(huán)指蛋白74抗體(重組激活基因1)
吉非羅齊(標準品)PazopanibRAE1 mRNA結合蛋白抗體
純綠青霉PCR檢測試劑盒規格人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C(PIPLC)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:50毫升
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人流行性腮腺炎(EP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:100條
人流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:800條/箱
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