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神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:VZV-IgM檢測試劑盒特異性: 系統和其它細胞因子無(wú)交叉反應。有效期: 6 個(gè)月(4℃);12 個(gè)月(-20℃)。用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養上清、細胞裂解液
產(chǎn)品分類(lèi)
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家 |
英文名稱(chēng) | Sarcocystis neuronaPCR |
貨號 | LZP7274 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Ginseside Rh41-溴-3-甲基-2- 93%醋酸棉酚 98%(HPLC)
Ginseside Rk21,3-酮二羧酸二乙酯 95%正丁 99%
Ginseside Rk13-溴酸乙酯 98%正丁 ≥99.5%(GC)
Ginseside Rk3乙酸 98%,無(wú)正丁 GCS,≥99.7% (GC)
Ginseside Ro4-苯甲酸甲酯 98%正戊烷 AR,99%
Ginseside Rs34- 98%硫代乙酰胺 AR,99%
Glaucin B4-甲氧基-3,5-二甲基-2-羥甲基吡啶 98%硫代乙酰胺 ACS, ≥99.0%
Glochidiol異硫酸甲酯 98%DL-乳酸 藥用級
Glochidone4-硝基吡啶-N-氧化物 98.0 %L-乳酸溶液 60%溶液
Glochidol噻吩甲酰三氟酮 98.0%L-乳酸鈉 AR,60%溶液
GlutineCH948B除濕機 除濕量48L/DDL-乳酸鈉 60%溶液
Glycoside L-F2對甲苯磺酸,— AR,99%聯(lián)苯 ≥99.5% (GC)
Glycyrrhetic acid 3-O-mo-beta-D-glucuronide對甲苯磺酸,— CP,98%二苯 CP
Glycyrrhetinic acid對甲苯磺酸,— ACS,≥98.5%對三聯(lián)苯 99%
Glycyrrhizic acid ammonium salt對乙酮 97%間三聯(lián)苯 98%
Glycyrrhizic acid3,5-二氨基苯甲酸 98%間三聯(lián)苯 分析標準品,用于環(huán)境分析, ≥99.5% (GC)
4(5)-甲基咪唑(>98%,BR)CD28 (CD28.2) Mouse mAb (FITC Conjugate)Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體
4-氯苯氧基乙酸鈉(>98%,植物激素級)c-Jun (60A8) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體
氫氧化鋁(>98%,BR)SV40 Large T Antigen (D1E9E) Rabbit mAbPhospho-p63 (Ser455) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體
磷酸銨三(>98%,BR)Ikaros (D6N9Y) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Phospho-p63 (Ser395) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體
碳酸鋇(>99%,BR)RIP3 (D8J3L) Rabbit mAbPhospho-p63 (Ser160/Ser162) 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體
苯甲酰胺(>98%,BR)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate)Phospho-p57 Kip2 (Thr310) 磷酸化周期蛋白依賴(lài)激酶抑制因子1C抗體
比布里希猩紅(>90%,BS)FastScan™ Total Akt1 ELISA KitPhospho-p56Dok2(Tyr351) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體
檸檬酸鈣;檸檬酸鈣四MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2) Rat mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)Phospho-p56Dok2(Tyr299) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體
硫酸銫(分子生物學(xué)級)CD99 AntibodyPhospho-p56Dok2(Tyr142) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2抗體
銅片Phospho-SQSTM1/p62 (Ser349) (E7M1A) Rabbit mAbphospho-p53BP1(Ser25/29) 磷酸化p53結合蛋白1抗體
神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家小鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量:RT5克
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