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漢坦病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:BEM-2檢測試劑盒仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。
產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 漢坦病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7594 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
利托那韋C14H12O3叔丁基肼鹽酸鹽
羅格列酮C30H48O3甲氧羰基-氟酸
羅格列酮(標準品)C46H56N4O10對羥基甲酸甲酯
馬來(lái)酸羅格列酮C29H44O82,6-二甲基哌啶
馬來(lái)酸羅格列酮(標準品)C29H24O126-叔丁基--噻吩[2,D]嘧啶
降鈣素;醋酸鮭魚(yú)降鈣素C15H10O5N-(2',6'-二甲基)-2-哌啶甲酰
塞卡替尼C15H24N2OD(-)-阿糖酸鈣
塞克硝唑C15H10O6鄰二
塞克硝唑(標準品)C28H34O151-芐基哌啶
紅杉,西曲依 C16H14O62,5-二羥基磺酸鈣
醋酸舍莫瑞林 C15H10O5二四酸二鈉銅四水合物
磺嘧啶銀C16H12O5二三五酸鐵-鈉絡(luò )合物
磺嘧啶銀(標準品)C21H20O11氨基-基吡唑草酸鹽
辛伐他汀 C11H6O32,5-二甲酰
辛伐他汀,辛伐他?。藴势罚〤16H10O7溴-2,6-二吡啶
康普瑞汀酸二鈉鹽C18H18O21,二酸二酯
硫酸西梭米星/硫酸西索霉素C27H44O71-Boc-吡唑-酸頻哪酯
硫酸西梭米星(標準品)C15H10O8N-(2-基)
水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒ATH III 凝血酶Ⅲ100 ul
水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒APG4B/AUTL1 細胞自噬相關(guān)蛋白4B100 ul
雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶100 ul
瘦素(LEP)ELISA試劑盒APOD 載脂蛋白D100 ul
嗜酸性粒細胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒APOH 載脂蛋白H100 ul
嗜酸性粒細胞過(guò)氧化物酶(EPO)ELISA試劑盒APOE 載脂蛋白E100 ul
嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒APOJ 載脂蛋白J100 ul
嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)ELISA試劑盒Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白100 ul
嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA試劑盒APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白20 ul
漢坦病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒廠(chǎng)家組織丁酰膽堿酯酶活性比色法定量elisa試劑盒 20次 *
組織丁酰膽堿酯酶活性比色法定量elisa試劑盒 20次 *
組織低密度脂蛋白膽固醇(LDL-Cholesterol)酶連續循環(huán)比色法定量elisa試劑盒 20次 *
組織蛋白巰基/結合巰基含量熒光定量elisa試劑盒 20次 *
組織蛋白巰基/結合巰基含量比色法定量elisa試劑盒 20次 *
組織蛋白酶G(cathepsin G)0.25單位*
組織蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量elisa試劑盒 20次 *
組織蛋白磷酸酶2A (PP2A)活性酶連續循環(huán)比色法定量elisa試劑盒 20次 *
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。