QGY7701細胞

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產(chǎn)品名稱(chēng)：肝癌細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：QGY7701細胞

貨號：LZ-X969517
規格：T25
生長(cháng)特性：貼壁

凍存培養基：
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗報告：
一、分離與培養：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體金屬蛋白酶組織抑制因子-2(抗原)苯-4羥化酶（AH）測試盒TSA 瓊脂

?；o酶A脫氫酶長(cháng)鏈抗體金屬蛋白酶組織抑制因子(抗原)紅霉素-N-脫甲基酶（ERND）測試盒胰蛋白胨大豆肉湯   

分裂周期蛋白5抗體胰島素原土壤脲酶（UE)測試盒Baird-Parker瓊脂基礎    

β淀粉樣肽/Aβ42抗體腎上腺髓質(zhì)素受體（抗原）土壤β-葡萄糖苷酶（β - GC）測試盒亞碲酸鹽卵黃增菌液

ADCK4蛋白抗體纖溶酶原激活物抑制因子土壤纖維素酶（S-CL）測試盒兔血漿  

抑癌蛋白AIMP3抗體角蛋白7土壤過(guò)氧化氫酶（S-CAT）測試盒DNA酶瓊脂   

相關(guān)蛋白AKAP抗體異硫酸熒光素(FITC)標記糖尿病相關(guān)肽1-37土壤硝酸還原酶（S-NR）測試盒7.5%肉湯   

蛋白激酶A錨定蛋白6抗體凋亡蛋白活性因子-1（抗原）土壤蔗糖酶(S-SC)測試盒普通肉湯培養基     

肺α/β水解酶蛋白1抗體凋亡蛋白活性因子-1（抗原）土壤無(wú)機磷（S-PHOS）含量測試盒腸素產(chǎn)培養基

水解酶結構域蛋白13抗體雄激素受體（多肽抗原）土壤脫氫酶(SDHA)測試盒亞碲酸鈉肉湯培養基基礎   

水解酶結構域蛋白14B抗體5-羥色受體2A抗原土壤中性蛋白酶測試盒葡萄球菌增菌肉湯  

水解酶結構域蛋白15抗體凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗原土壤堿性蛋白酶葡萄球菌選擇性瓊脂   

肺α/β水解酶蛋白3抗體5-羥色受體3抗原FDA水解酶試劑盒北沙參亞碲酸鈉胨水培養基基礎

三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白F亞基3抗體5-羥色受體4抗原土壤酸性蛋白酶試劑盒葡萄球菌選擇性瓊脂110(CHAPMAN 瓊脂)

三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白A亞基5抗體粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗原植物脫氫酶(SDHA)測試盒甘露卵黃培養基基礎
QGY7701細胞小鼠白介素1常春藤皂苷元(標準品)Human, Mouse, Rat

人胰島抗體常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷Human, Mouse

大鼠巨噬集落激因子常山（標準品）Human, Mouse, Rat

大鼠巨噬來(lái)源的趨化因子巢脾（標準品）Human, Mouse

人抗唾液腺導管組織抗體朝藿定A(標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠白介素1β朝藿定A1(標準品)Human, Mouse, Rat

人抗紡錘體抗體朝藿定C（標準品）Human, Mouse, Rat

大鼠巨噬炎性蛋白2車(chē)前草（標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠肌紅蛋白車(chē)前草（車(chē)前）（標準品）Human
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞，并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。