MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒

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中文名稱(chēng)：MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱(chēng)：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

產(chǎn)品規格：500次
產(chǎn)品貨號：LZ-01X6321

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

實(shí)驗報告：

一、分離與培養：

    1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

    1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；

    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

培養操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長(cháng)至覆蓋培養板底部2/3面積時(shí)，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 

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MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒Hoechst 33258染色液    

Hoechst 33342細胞藍色熒光染料    

Hoechst 33342染色液    

活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)    

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì )影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì )導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(cháng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會(huì )增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來(lái)配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(cháng)短根據細胞的類(lèi)型和細胞的密度等實(shí)驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時(shí)即可，白細胞需要培養較長(cháng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。