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素C棕櫚酸酯/L-抗壞血酸棕櫚酸酯EI24 (D3F6Z) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯阿斯巴甜Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)對甲酸甲酯克拉維酸Fas (C18C12) Rabbit mAb肼基甲酸20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒
產(chǎn)品分類(lèi)
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 豬水皰性口炎(VSV)核酸試劑盒說(shuō)明書(shū) |
規格 | 48T |
貨號 | LZP7991 |
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
靛藍二磺酸鈉ATP2A1/SERCA1 (L24) Antibody羥基-甲酸
變色酸鈉,鉻變酸二鈉HMGCS1 (D1Q9D) Rabbit mAb氟-三氟酚
溴百里酚藍鈉鹽Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody衣康酸二甲酯
特地唑游離CDC37 (D28H7) Rabbit mAbN,N-二酰
水合;三Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)聚氧氫化蓖麻油
對二甲氨基甲 (DMAB)Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)2-基呋喃
特地唑;特地唑酸酯Tie2 (AB33) Mouse mAb硅藻土
酚紅鈉鹽Phospho-Tie2 (Ser1119) Antibody氧基椰油烷基
甲基-2-并噻唑酮腙鹽酸鹽,水合β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)N,N'-二甲基-1,2-環(huán)己二
赤蘚紅;赤蘚紅B鈉鹽Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody順式-羥基-L-脯氨酸
達拉菲尼,達帕菲尼Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody3,5-二溴甲酸
安賽蜜;AK糖Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody甲酸甲酯
酰檸檬酸三丁酯NaPi2b/SLC34A2 (D6W2G) Rabbit mAbSOLUTOL HS 15
酰檸檬酸三酯Dexras1 Antibody2-溴-4'-酮
海藻酸nNOS (C7D7) Rabbit mAb對溴甲酸甲酯
維生素C棕櫚酸酯/L-抗壞血酸棕櫚酸酯EI24 (D3F6Z) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯
阿斯巴甜Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)對甲酸甲酯
克拉維酸Fas (C18C12) Rabbit mAb肼基甲酸
20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒PROK1/PRK1/EG-VEGF 內分泌腺衍生血管內皮生長(cháng)因子100 ul
2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) 酸化內分泌腺衍生血管內皮生長(cháng)因子100 ul
Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒VEGF-C 血管內皮生長(cháng)因子C型100 ul
Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒VEGFB 血管內皮生長(cháng)因子B300 ul
Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒VEGF-D 血管內皮生長(cháng)因子D型100 ul
Ⅰ型前膠原(PCⅠ)ELISA試劑盒VEGFR1 血管內皮生長(cháng)因子受體120 ul
Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒VEGF Receptor 2/VEGFR2 血管內皮生長(cháng)因子受體2100 ul
Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr951) 酸化血管內皮生長(cháng)因子受體220 ul
Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059) 酸化血管內皮生長(cháng)因子受體2100 ul
豬水皰性口炎(VSV)核酸試劑盒說(shuō)明書(shū)生長(cháng)激素釋放激素同源盒蛋白1抗體Oleandrin中文名:別名:分子式:C32H48O9
特異性囊腫病液體蛋白15β-Anhydrouzarigenin中文名:別名:β-Anhydroepidigitoxigenin分子式:C23H32O3
眼發(fā)育相關(guān)基因蛋白ODAG抗體Tenacigenin B中文名:別名:分子式:C21H32O5
腺苷酸環(huán)化酶Gα蛋白/Gαs/olf抗體Uzarigenin中文名:別名:Odorigenin B分子式:C23H34O4
谷氨酸受體紅藻氨酸離子2/谷氨酸受體6抗體Odoroside H中文名:別名:Digitoxigenin digitaloside分子式:C30H46O8